Описание

МУК -08 «Определение остаточных количеств дифлубензурона в воде хроматографическими методами»

Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование Российской Федерации

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточных количеств дифлубензурона
в воде хроматографическими методами

Методические указания
МУК 4.1.2349-08

1. Разработаны Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (Т.В. Юдина, Н.Е. Федорова, В.Н. Волкова, С.И. Волчек).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 6 декабря 2007 г. № 3).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 29 февраля 2008 г.

4. Введены в действие с 18 мая 2008 г.

5. Введены впервые.

Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный врач
Российской Федерации
Г.Г. Онищенко

29 февраля 2008 г.

Дата введения: 18 мая 2008 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств дифлубензурона
в воде хроматографическими методами

Методические указания
МУК 4.1.2349-08

Настоящие методические указания устанавливают методы высокоэффективной жидкостной и газожидкостной хроматографии для определения в воде массовой концентрации дифлубензурона в диапазоне 0,0025-0,025 мг/дм 3.

Белое кристаллическое вещество. Температура плавления 228°С. Давление паров при 25°С: 1,2·10 -4 мПа. Коэффициент распределения н-октанол-вода K_ow logP -3,89. Плотность - 1.56. Растворимость в воде (рН 7,25°С) - 0,08 мг/дм 3. Растворимость в органических растворителях (в г/дм 3. при 20°С): гексан - 0,063, толуол - 0,29, дихлорметан - 1,8, метанол 1,1.

Водные растворы стабильны в диапазоне рН от 5 до 7 ( LD ₅₀ более 150 дней), при рН 9 LD ₅ o - 42 дня. Растворы чувствительны к солнечному свету.

Краткая токсикологическая характеристика:

Острая пероральная токсичность ( LD ₅₀ ) для крыс и мышей - более 4600 мг/кг, острая дермальная токсичность ( LD ₅₀ ) для крыс - более 10000 мг/кг, острая ингаляционная токсичность для крыс ( LK ₅₀ ) - более 35 мг/дм 3.

Дифлубензурон используется в качестве инсектицида гормонального действия, нарушающего процесс образования хитина в организме насекомых. Активен против большого числа насекомых, обладает, в основном, кишечным действием. Рекомендуется для борьбы с болезными плодовых культур (яблоня), овощных (капуста), в лесопосадках для защиты грибов, борьбы с личинками комаров.

ПДК дифлубензурона в воде водоемов - 0,005 мг/дм 3.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствий с данной методикой погрешность (и её составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р =0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

Методика основана на определении вещества с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором (УФ) и газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с детектором постоянной скорости рекомбинации ионов (ДПР) после экстракции из анализируемой пробы воды гексаном и последующей очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей. Для газохроматографического измерения дифлубензурон подвергают кислотному гидролизу с последующей обработкой трифторуксусным ангидридом.

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны (фирмы Perkin - Elmer. США)

Номер в Государственном реестре средств измерений 15945-97

Газовый хроматограф «Цвет-560», снабженный детектором постоянной скорости рекомбинации ионов с пределом детектирования по линдану 4·10 -14 г/см 3

Номер в Государственном реестре средств измерений 14516-95

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007. требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019. а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный и газовый хроматографы.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно-допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном и газовом хроматографах.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20±5)°С и относительной влажности не более 80%.

- выполнение измерений на хроматографах проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, приготовление растворов, градуировочных растворов и растворов внесения, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты, до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

Навеску гидроксида натрия массой 50 г помещают в мерную колбу вместимостью 100 см 3. доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

Для приготовления 3.6М и 1М растворов в мерные колбы вместимостью 100 см 3. содержащие 30-40 см 3 дистиллированной воды, помещают соответственно 30 см 3 или 8 см 3 соляной кислоты, доводят дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивают.

В мерную колбу вместимостью 1000 см 3 помещают 550 см 3 ацетонитрила и 450 см 3 бидистиллированной или деионизованной воды, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.4) при скорости подачи растворителя 0,3 см 3 /мин до установления стабильной базовой линии.

Готовую насадку (Супелкопорт с 5% OV -210) засыпают в стеклянную колонку длиной 1 м, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 260°С в течение 10--12 ч.

7.7.1.1. Исходный раствор дифлубензурона для градуировки (концентрация 1 мг/см 3 ). В мерную колбу вместимостью 100 см 3 вносят 0,100 г дифлубензурона, добавляют 50-70 см 3 ацетонитрила, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 3-х месяцев.

Растворы № 1-5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.

7.7.1.2. Раствор № 1 дифлубензурона для градуировки и внесения (концентрация 10 мкг/см 3 ).

В мерную колбу вместимостью 100 см 3 помещают 1 см 3 исходного раствора дифлубензурона с концентрацией 1 мг/см 3 ( п. 7.7.1.1 ), разбавляют ацетонитрилом до метки, перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.

Раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом «внесено- найдено», а также контроле качества результатов измерений методом добавок.

7.7.1.3. Рабочие растворы № 2-5 дифлубензурона для градуировки (концентрация 0,1-1,0 мкг/см 3 ).

В 4 мерные колбы вместимостью 100 см 3 помещают по 1,0, 2,0, 5,0 и 10,0 см 3 градуировочного раствора № 1 с концентрацией 10 мкг/см 3 (п. 7.7.1.2. ), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 7.4.. тщательно перемешивают, получают рабочие растворы №№ 2-5 с концентрацией дифлубензурона 0,1, 0,2, 0.5 и 1,0 мкг/см 3. соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике в течение недели.

7.7.2.1. Исходный раствор дифлубензурона для градуировки (концентрация 200 мкг/см 3 ). В мерную колбу вместимостью 100 см 3 вносят 0,0200 г дифлубензурона, добавляют 50-70 см 3 метанола, перемешивают, доводят метанолом до метки, вновь перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 3-х месяцев.

7.7.2.2. Раствор № 1 производного дифлубензурона для градуировки (соответствует концентрации дифлубензурона 20 мкг/см 3 )

В круглодонную колбу вместимостью 100 см 3 помещают 1 см 3 исходного раствора дифлубензурона с концентрацией 200 мкг/см 3 ( п. 7.7.2.1 ), растворитель отдувают потоком теплого воздуха и проводят гидролиз и дериватизацию согласно п.п. 9.2 и 9.3 соответственно. Раствор полученного производного упаривают до 5-7 см 3. переносят в мерную пробирку и добавляют бензол до объема 10 см 3. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.

Растворы № 2-5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления раствора № 1 производного дифлубензурона для градуировки.

7.7.2.3. Рабочие растворы № 2-5 производного дифлубензурона для градуировки (соответствуют концентрации дифлубензурона 0,1-1,0 мкг/см 3 ).

В 4 мерные колбы вместимостью 100 см 3 помещают по 0,5, 1,0, 2,5 и 5,0 см 3 градуировочного раствора № 1 с концентрацией 20 мкг/см 3 ( п. 7.7.2.2 ), доводят до метки бензолом, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы №№ 2-5 с концентрацией дифлубензурона 0,1, 0,2, 0,5 и 1,0 мкг/см. соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике в течение недели.

Градуировочную характеристику, выражающую линейную (с угловым коэффициентом) зависимость площади пика (отн. единицы) от концентрации дифлубензурона в растворе (мкг/см 3 ), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки №№ 2-5.

В инжектор хроматографа вводят по 20 мм 3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4.1. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площади пиков дифлубензурона.

Градуировочную характеристику, выражающую линейную (с угловым коэффициентом) зависимость высоты пика (мм) от концентрации дифлубензурона в растворе (мкг/см 3 ), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам производного дифлубензурона для градуировки №№ 2-5.

В испаритель хроматографа вводят по 1 мм 3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4.2. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают высоты пиков производного дифлубензурона.

Отбор проб производится в соответствии с ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору проб», «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (№ 2051-79 от 21.08.79).

Пробы воды анализируют в день отбора, при необходимости хранят в холодильнике при температуре 4-6°С в течение 10-ти дней. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре -18°С.

Перед анализом образцы воды фильтруют через неплотный бумажный фильтр.

Образец анализируемой воды объемом 200 см 3 помещают в стакан вместимостью 400 см 3. добавляют 5-7 см 3 1М соляной кислоты до рН не более 2 (контроль по индикаторной бумаге). Подкисленный раствор переносят в делительную воронку вместимостью 500 см 3. приливают 50 см 3 гексана, интенсивно встряхивают в течение 1 мин. После полного разделения фаз верхний органический слой переносят в коническую колбу вместимостью 250 см 3. Водную фазу возвращают в делительную воронку, операцию экстракции повторяют еще дважды порциями гексана по 50 см 3. Объединенный гексановый экстракт помещают в делительную воронку вместимостью 250 см 3. приливают 50 см 3 ацетонитрила, интенсивно встряхивают в течение 1 мин. После полного разделения фаз нижний ацетонитрильный слой переносят в круглодонную колбу вместимостью 250 см 3. фильтруя его через слой (2 см) безводного сульфата натрия, помещенный в конусную химическую воронку диаметром 60 мм, снабженную бумажным фильтром «красная лента». Операцию экстракции гексанового раствора повторяют еще дважды порциями ацетонитрила по 50 см 3. Отстоявшийся слой хлористого метилена (нижняя фаза) фильтруют в колбу с ранее полученным экстрактом.

Объединенный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40°С почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха.

Сухой остаток при проведении измерений методом ВЭЖХ (по п. 9.4.1 ) растворяют в 5 см 3 подвижной фазы, центрифугируют (фильтруют через слой стекловаты, помещенный в конусную химическую воронку) и анализируют содержание дифлубензурона в соответствии с п. 9.4.1.

При проведении измерений методом ГЖХ (по п. 9.4.2 ) сухой остаток подвергают гидролизу и дериватизации в соответствии с п.п. 9.2 и 9.3 .

В колбу с сухим остатком, полученным по п. 9.1 (или при упаривании исходного раствора дифлубензурона по п. 7.7.2.2 ), вносят 60 см 3 3,6М раствора соляной кислоты, подсоединяют обратный холодильник, выдерживают колбу в течение 6-ти часов на кипящей водяной бане. После охлаждения к реакционной массе добавляют 12.5 № раствор гидроксида натрия до рН10 (контроль по индикаторной бумаге), переносят в делительную воронку вместимостью 250 см 3. вносят в воронку 50 см 3 бензола, интенсивно встряхивают 1 мин. После полного разделения фаз верхний органический слой переносят в круглодонную колбу вместимостью 250 см 3. фильтруя его через слой (2 см) безводного сульфата натрия, помещенный в конусную химическую воронку диаметром 60 мм, снабженную бумажным фильтром «красная лента». Операцию экстракции водного раствора повторяют еще дважды порциями бензола по 50 см 3. Отстоявшийся слой бензола (верхний слой) фильтруют через сульфат натрия в колбу с ранее полученным экстрактом.

Объединенный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40°С до объема 20-30 см 3 и подвергают дериватизации по п. 9.3.

В колбу с бензольным раствором, полученным по п. 9.2. вносят 0,5 см 3 ангидрида трифторуксусной кислоты, подсоединяют обратный холодильник, выдерживают колбу на водяной бане при температуре 50°С в течение 3-х часов. После охлаждения раствор упаривают до 3-4 см 3. переносят в градуированную пробирку вместимостью 5 см 3. доводят бензолом до объема 5 см 3 и анализируют содержание дифлубензурона в соответствии с п. 9.4.2

Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором (фирмы Perkin - Elmer. США)

Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 2 мм, содержащая Spherisorb S 5 ODS 2, зернением 5 мкм.

Температура колонки: комнатная.

Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (55:45, по объему).

Скорость потока элюента: 0,3 см 3 /мин.

Рабочая длина волны: 280 нм.

Чувствительность: 0,02 ед. абсорбции на шкалу.

Объем вводимой пробы: 20 мм 3.

Ориентировочное время выхода дифлубензурона: 7,36-7,78 мин.

Линейный диапазон детектирования 2-20 нг.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор дифлубензурона с концентрацией 1 мкг/см 3. разбавляют (не более чем в 50 раз) подвижной фазой для ВЭЖХ (подготовленной по п. 7.4. ).

Хроматограф газовый «Цвет 560-02» с детектором постоянной скорости рекомбинации ионов.

Колонка стеклянная длиной 1 м, внутренним диаметром 3 мм, заполненная Супелкопортом (0,16-0,12 мм) с 15% OV -210

Температура термостата колонки - 130°С

Скорость газа-носителя (азот) - 25±1 см 3 /мин.

Рабочая шкала электрометра - 64·10 10 ом.

Объем вводимой пробы - 1 мм 3.

Ориентировочное время удерживания производного дифлубензурона 2 мин 35 с.

Линейный диапазон детектирования: 0,1-1,0 нг.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор производного дифлубензурона с концентрацией 1 мкг/см 3. разбавляют (не более чем в 50 раз) бензолом.

Содержание дифлубензурона в пробе рассчитывают по формуле:

где Х - содержание дифлубензурона в пробе, мг/дм 3 ;

А - концентрация дифлубензурона, найденная по градуировочному графику, в соответствии с величиной площадей (высоты) хроматографического пика, мкг/см 3 ;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см 3 ;

V - объем анализируемого образца воды, см 3.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результа тов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

мг/дм 3 при вероятности Р=0,95, где

- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/дм 3 ;

Δ - граница абсолютной погрешности, мг/дм 3 ;

δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1 ), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе менее 0,0025 мг/дм 3 »*

* - 0,0025 мг/дм 3 - предел обнаружения

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецинзионность) методов и результатов измерений».

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Величина добавки С_д должна удовлетворять условию:

- характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/дм 3. при этом:

Δ - граница абсолютной погрешности, мг/дм 3 ;

δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1 ), %.

Результат контроля процедуры К_к рассчитывают по формуле:

- среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11 ) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/дм 3 ;

Норматив контроля К рассчитывают по формуле

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К_к ) с нормативом контроля (К ).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости ( R )

Х₁. Х₂ - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/дм 3 ;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1 ), %.

© 2007 ООО «МЦК» Независимая строительная экспертиза недвижимости: обследование зданий, контроль качества строительства, техническое проектирование домов в Москве и регионах России. Энергетическое обследование зданий и энергоаудит предприятий.